-1)組或?qū)φ战M、蔓性千斤拔素A 30 μmol·L-1、SCH772984 10 μmol·L-1+蔓性千斤拔素A 30 μmol·L-1和SCH772984 10 μmol·L-1濃度組,對(duì)照組細(xì)胞培養(yǎng)液為含1%胎牛血清的RMPI 1640培養(yǎng)基,其余各組分別加入蔓性千斤拔素A或SCH772984(預(yù)處理細(xì)胞1 h)使達(dá)到相應(yīng)濃度,連續(xù)培養(yǎng)12 h。MTT法檢測(cè)細(xì)胞活力;細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞集落形成的情況;細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)自噬的情況;免疫熒光檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)LC3B蛋白表達(dá)水平的變化;Western blotting實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)磷酸化的細(xì)胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(p-ERK)、磷酸化的哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶標(biāo)(p-mTOR)、自噬相關(guān)蛋白Beclin 1(Beclin 1)、螯合體1(P62)蛋白表達(dá)水平的變化。結(jié)果 與對(duì)照組比較,MTT法檢測(cè)結(jié)果顯示各濃度(20、25、30 μmol·L-1)蔓性千斤拔素A能夠顯著抑制A549細(xì)胞活力(P<0.05、0.001),SCH772948 (10 μmol·L-1)能夠顯著逆轉(zhuǎn)蔓性千斤拔素A誘導(dǎo)的A549細(xì)胞死亡(P<0.01);細(xì)胞集落形成實(shí)驗(yàn)顯示20、25、30 μmol·L-1蔓性千斤拔素A能顯著抑制A549細(xì)胞集落的形成(P<0.001);細(xì)胞自噬染色檢測(cè)試劑盒結(jié)果顯示20、25、30 μmol·L-1蔓性千斤拔素A能顯著抑制A549細(xì)胞自噬,SCH772948 10 μmol·L-1能夠顯著逆轉(zhuǎn)蔓性千斤拔素A介導(dǎo)的A549細(xì)胞自噬抑制;免疫熒光結(jié)果顯示蔓性千斤拔素A 30 μmol·L-1能夠顯著減弱LC3B的熒光,SCH772948 10 μmol·L-1能夠顯著逆轉(zhuǎn)蔓性千斤拔素A導(dǎo)致的LC3B熒光減弱;Western blotting實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,20、25、30 μmol·L-1蔓性千斤拔素A能夠使A549細(xì)胞內(nèi)p-ERK、p-mTOR、P62蛋白表達(dá)水平顯著升高及Beclin 1蛋白表達(dá)水平顯著降低(P<0.001),SCH772948 10 μmol·L-1能夠顯著逆轉(zhuǎn)蔓性千斤拔素A導(dǎo)致的A549細(xì)胞內(nèi)p-ERK、p-mTOR、P62蛋白表達(dá)水平升高及Beclin 1蛋白降低(P<0.001)。結(jié)論 蔓性千斤拔素A可通過(guò)ERK/mTOR通路抑制非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞自噬并導(dǎo)致細(xì)胞死亡。"/>

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首頁(yè) > 過(guò)刊瀏覽>2024年第47卷第9期 >2024,47(9):2090-2098. DOI:10.7501/j.issn.1674-6376.2024.09.017
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基于ERK/mTOR通路探討蔓性千斤拔素A對(duì)非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞自噬的影響

Effect of flemiphilippinin A on autophagy in non-small cell lung cancer cells based on ERK/mTOR pathway

發(fā)布日期:2024-09-09
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