摘要:
目的 研究TRAIL基因修飾的臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(TRAIL-MSCs)聯(lián)合化療藥5-氟尿嘧啶(5-FU)對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞U-87MG、人肺癌細(xì)胞A549和人宮頸癌細(xì)胞HeLa的殺傷作用。方法 通過(guò)基因工程手段結(jié)合慢病毒轉(zhuǎn)染體系構(gòu)建高表達(dá)十二聚體TRAIL蛋白(dTRAIL)的TRAIL-MSCs,應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)TRAIL-MSCs的生物學(xué)特性;通過(guò)ELISA技術(shù)檢測(cè)TRAIL-MSCs分泌的TRAIL量來(lái)評(píng)估轉(zhuǎn)染效果;CCK-8法檢測(cè)低濃度(0、1、2、4、8、16 μg/mL)5-FU對(duì)U-87MG、A549、HeLa細(xì)胞的增殖抑制率,并計(jì)算其對(duì)各細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50);CCK-8法檢測(cè)5-FU(IC50)、UC-MSCs培養(yǎng)上清、TRAIL-MSCs培養(yǎng)上清、5-FU(IC50)+UC-MSCs培養(yǎng)上清和5-FU(1/4 IC50、1/2 IC50和IC50)+TRAIL-MSCs培養(yǎng)上清對(duì)U-87MG、A549、HeLa細(xì)胞的增殖抑制率,計(jì)算5-FU和TRAIL-MSCs培養(yǎng)上清的相互作用系數(shù)(CDI);Westernblotting法檢測(cè)5-FU對(duì)U-87MG、A549、HeLa細(xì)胞死亡受體DR4、DR5蛋白表達(dá)的影響;臺(tái)盼藍(lán)染色法觀(guān)察5-FU、UC-MSCs、TRAIL-MSCs、5-FU+UC-MSCs和5-FU+TRAIL-MSCs對(duì)U-87MG、A549、HeLa細(xì)胞的殺傷作用。結(jié)果 生物學(xué)檢測(cè)結(jié)果表明TRAIL-MSCs在維持UC-MSCs生物學(xué)特性的同時(shí)能夠高表達(dá)TRAIL蛋白。5-FU對(duì)U-87MG、A549、HeLa細(xì)胞均有增殖抑制作用,抑制作用由高到底依次為HeLa細(xì)胞(IC50為9.15 μg/mL) >A549細(xì)胞(IC50為10.62 μg/mL) >U-87MG細(xì)胞(IC50為22.37 μg/mL)。與對(duì)照組比較,除A549細(xì)胞UC-MSCs培養(yǎng)上清組外,各處理組細(xì)胞增殖抑制率均顯著升高(P<0.01、0.001);與相應(yīng)各5-FUIC50及TRAIL-MSCs培養(yǎng)上清組比較,U-87MG、HeLa細(xì)胞5-FU (1/4 IC50、1/2 IC50和IC50) +TRAIL-MSCs培養(yǎng)上清組細(xì)胞增殖抑制率均顯著升高(P<0.001),A549細(xì)胞5-FU (IC50) +TRAIL-MSCs培養(yǎng)上清組細(xì)胞增殖抑制率顯著升高(P<0.01、0.001);5-FU (1/2 IC50) +TRAIL-MSCs培養(yǎng)上清組對(duì)U-87MG的細(xì)胞增殖抑制協(xié)同效應(yīng)最顯著(CDI<0.7且P<0.001); 5-FU (1/4 IC50) +TRAIL-MSCs培養(yǎng)上清組對(duì)A549的細(xì)胞增殖抑制具有協(xié)同作用,但其協(xié)同效果并不顯著; 5-FU (1/4 IC50) +TRAIL-MSCs培養(yǎng)上清組對(duì)HeLa細(xì)胞增殖抑制的協(xié)同效果最顯著(CDI<0.7且P<0.01)。經(jīng)5-FU處理后U-87MG、A549、HeLa細(xì)胞DR4和DR5的蛋白表達(dá)明顯升高,其中DR5的表達(dá)水平高于DR4,與對(duì)照組比較差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。與對(duì)照組比較,5-FU、TRAIL-MSCs和5-FU+TRAIL-MSCs組對(duì)于腫瘤細(xì)胞U-87MG、A549、HeLa均具顯著的殺傷作用(P<0.001);與5-FU或TRAIL-MSCs組比較,5-FU+TRAIL-MSCs組的殺傷效果更顯著(P<0.001)。結(jié)論 TRAIL-MSCs聯(lián)合低濃度的5-FU對(duì)腫瘤細(xì)胞U-87MG、A549和HeLa具有顯著的細(xì)胞殺傷作用,二者聯(lián)用協(xié)同效果顯著,機(jī)制可能與5-FU提高DR4、DR5蛋白表達(dá)、提高腫瘤細(xì)胞對(duì)TRAIL-MSCs的敏感性相關(guān)。