摘要:
目的 探究黃芩莖葉總黃酮(SSTF)治療潰瘍性結(jié)腸炎(UC)合并貧血的藥效及作用機(jī)制。方法 通過(guò)文獻(xiàn)查閱和Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)獲取SSTF中黃酮成分及其作用靶點(diǎn);通過(guò)GeneCards、OMIM和TTD數(shù)據(jù)庫(kù)收集UC合并貧血疾病靶點(diǎn);使用Venny 2.1繪圖軟件獲取藥物和疾病交集靶點(diǎn);將交集靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)構(gòu)建蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò);采用Metascape數(shù)據(jù)平臺(tái)進(jìn)行基因本體(GO)功能和京都基因和基因組百科全書(KEGG)通路富集分析;再采用AutoDock 1.5.7軟件對(duì)主要活性成分和關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接。利用噁唑酮建立UC小鼠模型,模型成功小鼠隨機(jī)分為模型組、溶媒(0.5%羧甲基纖維素鈉)組、柳氮磺吡啶腸溶片(SASP,陽(yáng)性藥,450 mg·kg−1)組和SSTF低、中、高劑量(26、52、104 mg·kg−1)組,每組15只。另設(shè)15只小鼠作為對(duì)照組,不造模。各治療組從第9天開始ig相應(yīng)藥物,對(duì)照組與模型組給予0.9%的氯化鈉溶液,每天1次,連續(xù)7 d。從第8天開始每天稱小鼠體質(zhì)量,進(jìn)行疾病活動(dòng)指數(shù)(DAI)評(píng)分;給藥結(jié)束后取材,測(cè)量結(jié)腸長(zhǎng)度,對(duì)脾臟組織稱質(zhì)量,并計(jì)算脾臟指數(shù);蘇木素-伊紅(HE)染色進(jìn)行結(jié)腸組織病理學(xué)檢查,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)試劑盒法檢測(cè)血清腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白細(xì)胞介素10(IL-10)、促紅細(xì)胞生成素(EPO)、血紅蛋白(HGB)、鐵(SI)、鐵蛋白(SF)、鐵調(diào)素(Hepcidin)和可溶性轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(sTfR)水平,實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)法檢測(cè)脾組織促紅細(xì)胞生成素受體(EPOR)、赤鐵酮(ERFE)、膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(FPN/SLC40A1)和肝組織鐵調(diào)素(Hepcidin)、FPN mRNA表達(dá)。結(jié)果 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)結(jié)果表明,SSTF中27個(gè)黃酮成分可作用于EPO、EPOR等25個(gè)交集靶點(diǎn),調(diào)控JAK/STAT等信號(hào)通路。分子對(duì)接結(jié)果表明主要活性成分黃芩苷、漢黃芩苷、木犀草素、野黃芩苷、野黃芩素、芹菜素與關(guān)鍵靶點(diǎn)間結(jié)合穩(wěn)定。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,與模型組比較,SSTF組小鼠體質(zhì)量顯著升高、DAI評(píng)分顯著降低、脾臟指數(shù)顯著降低、結(jié)腸長(zhǎng)度顯著增加(P<0.05、0.01);結(jié)腸組織病理?yè)p傷明顯改善;血清中Hepcidin、sTfR、TNF-α水平顯著降低(P<0.05、0.01),血清SF、SI、HGB、EPO、IL-10水平顯著升高(P<0.05、0.01);小鼠脾組織中EPOR、ERFE、FPN mRNA表達(dá)水平和肝組織中FPN mRNA表達(dá)水平顯著升高(P<0.05、0.01),肝組織中Hepcidin mRNA表達(dá)水平顯著降低(P<0.05)。結(jié)論 SSTF可通過(guò)調(diào)節(jié)EPOR/ERFE/FPN信號(hào)軸治療UC合并貧血。