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主辦：天津藥物研究院 中國藥學(xué)會
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2013, 44(2):199-202.
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.02.016
摘要:
目的 觀察雷公藤甲素脂質(zhì)體透皮制劑對II型膠原誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎（CIA）的影響及不良反應(yīng)。方法 制備CIA小鼠模型。造模后小鼠隨機分為模型組、雷公藤片劑對照組、雷公藤甲素脂質(zhì)體透皮制劑（簡稱透皮制劑）高、中、低劑量（200、100、50 mg/kg）組。免疫組化法計數(shù)滑膜血管翳數(shù)目；檢測血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和尿素氮（BUN）水平；觀察小鼠心、肝、腎、胃病理組織學(xué)改變。結(jié)果 與模型組比較，透皮制劑高劑量組和雷公藤片劑組滑膜增生血管翳數(shù)量顯著減少（P＜0.01）。與模型組比較，雷公藤片劑組小鼠血清ALT和BUN水平顯著升高（P＜0.01）；透皮制劑高、中、低劑量組小鼠血清ALT和BUN水平較雷公藤片劑組顯著降低（P＜0.01）。雷公藤片劑組小鼠顯示明顯的心、肝、腎、胃細胞及組織損傷；透皮制劑高劑量組小鼠心、肝、腎、胃均未發(fā)現(xiàn)明顯的病理改變。結(jié)論 雷公藤甲素脂質(zhì)體透皮制劑高劑量和雷公藤片劑均具有抗CIA的作用；雷公藤甲素脂質(zhì)體透皮制劑具有較高的生物活性，與口服給藥的作用相當(dāng)，且明顯減少大劑量口服給藥所產(chǎn)生的不良反應(yīng)。
目的 觀察雷公藤甲素脂質(zhì)體透皮制劑對II型膠原誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎（CIA）的影響及不良反應(yīng)。方法 制備CIA小鼠模型。造模后小鼠隨機分為模型組、雷公藤片劑對照組、雷公藤甲素脂質(zhì)體透皮制劑（簡稱透皮制劑）高、中、低劑量（200、100、50 mg/kg）組。免疫組化法計數(shù)滑膜血管翳數(shù)目；檢測血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和尿素氮（BUN）水平；觀察小鼠心、肝、腎、胃病理組織學(xué)改變。結(jié)果 與模型組比較，透皮制劑高劑量組和雷公藤片劑組滑膜增生血管翳數(shù)量顯著減少（P＜0.01）。與模型組比較，雷公藤片劑組小鼠血清ALT和BUN水平顯著升高（P＜0.01）；透皮制劑高、中、低劑量組小鼠血清ALT和BUN水平較雷公藤片劑組顯著降低（P＜0.01）。雷公藤片劑組小鼠顯示明顯的心、肝、腎、胃細胞及組織損傷；透皮制劑高劑量組小鼠心、肝、腎、胃均未發(fā)現(xiàn)明顯的病理改變。結(jié)論 雷公藤甲素脂質(zhì)體透皮制劑高劑量和雷公藤片劑均具有抗CIA的作用；雷公藤甲素脂質(zhì)體透皮制劑具有較高的生物活性，與口服給藥的作用相當(dāng)，且明顯減少大劑量口服給藥所產(chǎn)生的不良反應(yīng)。
2014, 45.
摘要:
目的 對連接黑三棱初生代謝及次生代謝途徑的關(guān)鍵酶苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine ammonia lyase，PAL），進行基因全長的克隆和生物學(xué)信息分析。方法 以黑三棱總RNA為模板，采用同源克隆法和RACE技術(shù)克隆黑三棱PAL基因的cDNA全長，并通過DNAMAN軟件和ExPASy在線分析等方法對其生物信息學(xué)進行分析。結(jié)果 獲得黑三棱PAL基因全長cDNA，GenBank注冊號為KF633470，序列分析表明，所克隆的cDNA全長為2 413 bp，包含一個2 151 bp的開放閱讀框架，編碼716個氨基酸的蛋白。預(yù)測該蛋白的相對分子質(zhì)量為1.98×105，等電點為4.84，無信號肽，含有PAL酶活性中心序列GTITASGDLVPLSYIAG。結(jié)論 首次克隆并獲得黑三棱PAL基因全長cDNA，為黑三棱藥效成分生源合成途徑的闡明和改善中藥材品質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)。
目的 對連接黑三棱初生代謝及次生代謝途徑的關(guān)鍵酶苯丙氨酸解氨酶（Phenylalanine ammonia lyase，PAL），進行基因全長的克隆和生物學(xué)信息分析。方法 以黑三棱總RNA為模板，采用同源克隆法和RACE技術(shù)克隆黑三棱PAL基因的cDNA全長，并通過DNAMAN軟件和ExPASy在線分析等方法對其生物信息學(xué)進行分析。結(jié)果 獲得黑三棱PAL基因全長cDNA，GenBank注冊號為KF633470，序列分析表明，所克隆的cDNA全長為2 413 bp，包含一個2 151 bp的開放閱讀框架，編碼716個氨基酸的蛋白。預(yù)測該蛋白的相對分子質(zhì)量為1.98×105，等電點為4.84，無信號肽，含有PAL酶活性中心序列GTITASGDLVPLSYIAG。結(jié)論 首次克隆并獲得黑三棱PAL基因全長cDNA，為黑三棱藥效成分生源合成途徑的闡明和改善中藥材品質(zhì)提供科學(xué)依據(jù)。
2014, 45.
摘要:
目的 分離珍稀瀕危藥用植物鐵皮石斛咖啡酰輔酶A氧甲基轉(zhuǎn)移酶（caffeoyl CoA O-methyltransferase，CCoAOMT）基因（DoOMT）并進行生物信息學(xué)和表達模式分析。方法 采用RT-PCR和RACE技術(shù)獲基因cDNA全長；利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測蛋白的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)域和三維建模等分子特性；用DNASTAR 6.0和MEGA 4.0分別進行氨基酸多序列比對和進化關(guān)系分析；借助實時定量PCR檢測基因表達模式。結(jié)果 分離到DoOMT（GenBank注冊號KF876839），cDNA全長1 005 bp，編碼一條由239個氨基酸組成的多肽，相對分子質(zhì)量為2.708×104，等電點5.03；DoOMT蛋白不含跨膜域和信號肽，具有氧甲基轉(zhuǎn)移酶family 3、甲基轉(zhuǎn)移酶的保守結(jié)構(gòu)域（13～238、31～238）和8個保守基序；DoOMT與植物CCoAOMTs蛋白一致性為49.4%～78.7%，所在分支隸屬于CCoAOMTs分子進化的1b類群，與單子葉植物香草親緣關(guān)系最近；DoOMT基因轉(zhuǎn)錄本在石斛根、莖、葉器官中為組成型表達，莖中相對表達量較高，為葉中的4.562倍，根和葉中無顯著差異。結(jié)論 鐵皮石斛咖啡酰輔酶A氧甲基轉(zhuǎn)移酶基因DoOMT的分子特征為進一步研究其在鐵皮石斛次生代謝和生長發(fā)育過程中的作用奠定基礎(chǔ)。
目的 分離珍稀瀕危藥用植物鐵皮石斛咖啡酰輔酶A氧甲基轉(zhuǎn)移酶（caffeoyl CoA O-methyltransferase，CCoAOMT）基因（DoOMT）并進行生物信息學(xué)和表達模式分析。方法 采用RT-PCR和RACE技術(shù)獲基因cDNA全長；利用生物信息學(xué)軟件預(yù)測蛋白的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)域和三維建模等分子特性；用DNASTAR 6.0和MEGA 4.0分別進行氨基酸多序列比對和進化關(guān)系分析；借助實時定量PCR檢測基因表達模式。結(jié)果 分離到DoOMT（GenBank注冊號KF876839），cDNA全長1 005 bp，編碼一條由239個氨基酸組成的多肽，相對分子質(zhì)量為2.708×104，等電點5.03；DoOMT蛋白不含跨膜域和信號肽，具有氧甲基轉(zhuǎn)移酶family 3、甲基轉(zhuǎn)移酶的保守結(jié)構(gòu)域（13～238、31～238）和8個保守基序；DoOMT與植物CCoAOMTs蛋白一致性為49.4%～78.7%，所在分支隸屬于CCoAOMTs分子進化的1b類群，與單子葉植物香草親緣關(guān)系最近；DoOMT基因轉(zhuǎn)錄本在石斛根、莖、葉器官中為組成型表達，莖中相對表達量較高，為葉中的4.562倍，根和葉中無顯著差異。結(jié)論 鐵皮石斛咖啡酰輔酶A氧甲基轉(zhuǎn)移酶基因DoOMT的分子特征為進一步研究其在鐵皮石斛次生代謝和生長發(fā)育過程中的作用奠定基礎(chǔ)。
2013, 44.
摘要:
摘 要：目的 對24份不同產(chǎn)地石斛屬樣品的遺傳多樣性和親緣關(guān)系進行分析。方法 采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)和非加權(quán)平均距離法（UPGMA）對24份石斛屬樣品進行遺傳多樣性和聚類分析。結(jié)果 從100條ISSR引物中共篩選出6條多態(tài)性穩(wěn)定、清晰的引物， 24份石斛樣品共擴增出847個DNA片段，平均每個引物擴增出141個DNA片段，其多態(tài)性為100%。結(jié)論 24份不同產(chǎn)地石斛樣品被劃分為6個類群，遺傳多樣性非常豐富。
摘 要：目的 對24份不同產(chǎn)地石斛屬樣品的遺傳多樣性和親緣關(guān)系進行分析。方法 采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)和非加權(quán)平均距離法（UPGMA）對24份石斛屬樣品進行遺傳多樣性和聚類分析。結(jié)果 從100條ISSR引物中共篩選出6條多態(tài)性穩(wěn)定、清晰的引物， 24份石斛樣品共擴增出847個DNA片段，平均每個引物擴增出141個DNA片段，其多態(tài)性為100%。結(jié)論 24份不同產(chǎn)地石斛樣品被劃分為6個類群，遺傳多樣性非常豐富。
2014, 45.
摘要:
目的 分析根腐病三七根內(nèi)細菌的多樣性。方法 用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基分離根腐病三七根內(nèi)的細菌，經(jīng)細菌通用引物27F/1492R擴增16S rDNA后，分別用Rsa I和Hin6 I限制性內(nèi)切酶對擴增產(chǎn)物進行酶切，結(jié)合限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分析方法和DNA測序技術(shù)，對分離自根腐病三七根內(nèi)的細菌進行初步鑒定。結(jié)果 根腐病三七根內(nèi)的細菌分屬于8個類群，依占總菌數(shù)的比例分別是芽孢桿菌屬Bacillus 22.47%、無色桿菌屬Achromobacter 5.62%、寡養(yǎng)單胞菌屬Stenotrophomonas 5.62%、類芽孢桿菌屬Paenibacillus 4.49%、鞘氨醇桿菌屬Sphingobacterium 1.12%、蒼白桿菌屬Ochrobactrum 1.12%、不動桿菌屬Acinetobacter 1.12%及腸桿菌科的一些屬58.43%。結(jié)論 泛菌屬和芽孢桿菌屬是根腐病三七根中的兩大優(yōu)勢細菌類群。
目的 分析根腐病三七根內(nèi)細菌的多樣性。方法 用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基分離根腐病三七根內(nèi)的細菌，經(jīng)細菌通用引物27F/1492R擴增16S rDNA后，分別用Rsa I和Hin6 I限制性內(nèi)切酶對擴增產(chǎn)物進行酶切，結(jié)合限制性片段長度多態(tài)性（RFLP）分析方法和DNA測序技術(shù)，對分離自根腐病三七根內(nèi)的細菌進行初步鑒定。結(jié)果 根腐病三七根內(nèi)的細菌分屬于8個類群，依占總菌數(shù)的比例分別是芽孢桿菌屬Bacillus 22.47%、無色桿菌屬Achromobacter 5.62%、寡養(yǎng)單胞菌屬Stenotrophomonas 5.62%、類芽孢桿菌屬Paenibacillus 4.49%、鞘氨醇桿菌屬Sphingobacterium 1.12%、蒼白桿菌屬Ochrobactrum 1.12%、不動桿菌屬Acinetobacter 1.12%及腸桿菌科的一些屬58.43%。結(jié)論 泛菌屬和芽孢桿菌屬是根腐病三七根中的兩大優(yōu)勢細菌類群。
2014, 45.
摘要:
目的 為旋覆花屬8種藥用植物的分子鑒定提供依據(jù)。方法 本研究對4種旋覆花屬藥用植物的8個樣本ITS2序列進行PCR擴增和測序，同時從GenBank下載13個樣本。用MEGA5.0計算其種間、種內(nèi)的K2P距離，各序列變異位點并進行聚類分析。結(jié)果 旋覆花屬8種藥用植物ITS2的長度為210～212 bp，變異位點為60個；旋覆花藥材2種不同來源藥用植物有3個變異位點，與其他同屬6種植物有13～43個變異位點；構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹顯示旋覆花藥材的不同基原樣本各聚為一支，能很好與其他6種植物區(qū)分；旋覆花Inula japonica、歐亞旋覆花I. britannica、總狀土木香I. racemosa、土木香I. helenium4個物種的遺傳距離值遠小于與羊耳菊I. cappa、赤莖羊耳菊I. rubricaulis、顯脈旋覆花I. nervosa、澤蘭羊耳菊I. eupatoerioides 4個物種的遺傳距離值。結(jié)論 ITS2序列能夠為旋覆花屬8種藥用植物的鑒定和Flora of China對羊耳菊、赤莖羊耳菊、顯脈旋覆花、澤蘭羊耳菊分類修訂提供一定的分子證據(jù)。
目的 為旋覆花屬8種藥用植物的分子鑒定提供依據(jù)。方法 本研究對4種旋覆花屬藥用植物的8個樣本ITS2序列進行PCR擴增和測序，同時從GenBank下載13個樣本。用MEGA5.0計算其種間、種內(nèi)的K2P距離，各序列變異位點并進行聚類分析。結(jié)果 旋覆花屬8種藥用植物ITS2的長度為210～212 bp，變異位點為60個；旋覆花藥材2種不同來源藥用植物有3個變異位點，與其他同屬6種植物有13～43個變異位點；構(gòu)建的系統(tǒng)發(fā)育樹顯示旋覆花藥材的不同基原樣本各聚為一支，能很好與其他6種植物區(qū)分；旋覆花Inula japonica、歐亞旋覆花I. britannica、總狀土木香I. racemosa、土木香I. helenium4個物種的遺傳距離值遠小于與羊耳菊I. cappa、赤莖羊耳菊I. rubricaulis、顯脈旋覆花I. nervosa、澤蘭羊耳菊I. eupatoerioides 4個物種的遺傳距離值。結(jié)論 ITS2序列能夠為旋覆花屬8種藥用植物的鑒定和Flora of China對羊耳菊、赤莖羊耳菊、顯脈旋覆花、澤蘭羊耳菊分類修訂提供一定的分子證據(jù)。
2013, 44(7):829-833.
DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2013.07.011
摘要:
目的 探討全國范圍內(nèi)白花蛇舌草注射液物質(zhì)基礎(chǔ)的差異性。方法 采用超高效液相色譜-四級桿-飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-QTOF-MS）對16批樣品進行測定，對采集的數(shù)據(jù)以保留時間和質(zhì)荷比作為變量，進行主成分分析（PCA）。結(jié)果 通過PCA發(fā)現(xiàn)不同企業(yè)生產(chǎn)的樣品自身差異較小，相互之間差異較大；通過載荷圖分析篩選出對分組影響比較大的7種標(biāo)記物。結(jié)論 全國范圍內(nèi)不同廠家生產(chǎn)的白花蛇舌草注射液不僅顏色差異較大，其內(nèi)在的物質(zhì)基礎(chǔ)也存在明顯的差異，這種差異主要體現(xiàn)在黃酮類和有機酸類成分的量上。
目的 探討全國范圍內(nèi)白花蛇舌草注射液物質(zhì)基礎(chǔ)的差異性。方法 采用超高效液相色譜-四級桿-飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-QTOF-MS）對16批樣品進行測定，對采集的數(shù)據(jù)以保留時間和質(zhì)荷比作為變量，進行主成分分析（PCA）。結(jié)果 通過PCA發(fā)現(xiàn)不同企業(yè)生產(chǎn)的樣品自身差異較小，相互之間差異較大；通過載荷圖分析篩選出對分組影響比較大的7種標(biāo)記物。結(jié)論 全國范圍內(nèi)不同廠家生產(chǎn)的白花蛇舌草注射液不僅顏色差異較大，其內(nèi)在的物質(zhì)基礎(chǔ)也存在明顯的差異，這種差異主要體現(xiàn)在黃酮類和有機酸類成分的量上。
2013, 44.
摘要:
摘 要：目的 獲得白花丹參丙酮酸脫羧酶全長基因，分析該基因在白花丹參不同組織部位，以及缺氧脅迫處理后的該基因表達差異。方法 利用cDNA文庫篩選獲得丙酮酸脫羧酶SmPDC基因全長，利用半定量RT-PCR，分析SmPDC基因在白花丹參不同部位的表達情況，及缺氧處理條件下的表達情況。結(jié)果 獲得的SmPDC基因由2 190個核苷酸組成，編碼605個氨基酸，蛋白相對分子質(zhì)量約6.485×104，等電點pI 5.49；半定量RT-PCR檢測，該基因在丹參的根中表達量最高，其次是莖和葉；缺氧脅迫處理會誘導(dǎo)該基因的表達，隨脅迫時間延長表達量逐漸增加。結(jié)論 白花丹參SmPDC基因是PDC家族新成員，其功能與植物耐缺氧代謝途徑有關(guān)。
摘 要：目的 獲得白花丹參丙酮酸脫羧酶全長基因，分析該基因在白花丹參不同組織部位，以及缺氧脅迫處理后的該基因表達差異。方法 利用cDNA文庫篩選獲得丙酮酸脫羧酶SmPDC基因全長，利用半定量RT-PCR，分析SmPDC基因在白花丹參不同部位的表達情況，及缺氧處理條件下的表達情況。結(jié)果 獲得的SmPDC基因由2 190個核苷酸組成，編碼605個氨基酸，蛋白相對分子質(zhì)量約6.485×104，等電點pI 5.49；半定量RT-PCR檢測，該基因在丹參的根中表達量最高，其次是莖和葉；缺氧脅迫處理會誘導(dǎo)該基因的表達，隨脅迫時間延長表達量逐漸增加。結(jié)論 白花丹參SmPDC基因是PDC家族新成員，其功能與植物耐缺氧代謝途徑有關(guān)。
2013, 44.
摘要:
摘 要：目的 在不同海拔進行當(dāng)歸Angelica sinensis生態(tài)適應(yīng)性實驗，探索影響當(dāng)歸阿魏酸積累的關(guān)鍵因子。方法 通過田間實驗測定當(dāng)歸阿魏酸量的變化和生理生化指標(biāo)、光合參數(shù)、生態(tài)因子。結(jié)果 當(dāng)歸根中阿魏酸量隨海拔升高而增加，且海拔2 780 m處理比海拔2 360 m處理高14.5%，差異顯著（P＜0.05）。分析影響當(dāng)歸阿魏酸積累的關(guān)鍵因子表明，降雨量（r＝0.898 8）和溫度（r＝?0.799 1）是關(guān)鍵生態(tài)因子，可溶性糖（r＝?0.974 9）和超氧化物歧化酶（SOD）（r＝?0.840 8）是關(guān)鍵生理生化因子，濕度（r＝0.969 9）和光合活性輻射(r＝0.946 7)是關(guān)鍵光合參數(shù)因子。結(jié)論 適當(dāng)升高種植海拔，增加降雨量和濕度，降低溫度和可溶性糖量均有利于當(dāng)歸中阿魏酸的轉(zhuǎn)化積累。
摘 要：目的 在不同海拔進行當(dāng)歸Angelica sinensis生態(tài)適應(yīng)性實驗，探索影響當(dāng)歸阿魏酸積累的關(guān)鍵因子。方法 通過田間實驗測定當(dāng)歸阿魏酸量的變化和生理生化指標(biāo)、光合參數(shù)、生態(tài)因子。結(jié)果 當(dāng)歸根中阿魏酸量隨海拔升高而增加，且海拔2 780 m處理比海拔2 360 m處理高14.5%，差異顯著（P＜0.05）。分析影響當(dāng)歸阿魏酸積累的關(guān)鍵因子表明，降雨量（r＝0.898 8）和溫度（r＝?0.799 1）是關(guān)鍵生態(tài)因子，可溶性糖（r＝?0.974 9）和超氧化物歧化酶（SOD）（r＝?0.840 8）是關(guān)鍵生理生化因子，濕度（r＝0.969 9）和光合活性輻射(r＝0.946 7)是關(guān)鍵光合參數(shù)因子。結(jié)論 適當(dāng)升高種植海拔，增加降雨量和濕度，降低溫度和可溶性糖量均有利于當(dāng)歸中阿魏酸的轉(zhuǎn)化積累。
2014, 45.
摘要:
目的 分析14種山藥種質(zhì)ITS序列，為山藥種質(zhì)資源分子鑒別和進化關(guān)系研究提供依據(jù)。方法 PCR克隆擴增ITS序列并進行雙向測序，Clustal X（v1.83）軟件進行序列比對，Mega（v4.1）計算序列核苷酸比例及遺傳距離，并構(gòu)建鄰接樹（Neighbor-joining tree，NJ Tree）和最大簡約樹（Maximum parsimony tree，MP Tree）。結(jié)果 14種山藥種質(zhì)ITS序列全長為558～594 bp，其中ITS1長度為141～165 bp，ITS2長度為146～158 bp；ITS序列存在大量的轉(zhuǎn)換、顛換，轉(zhuǎn)化/顛換比率為5.347，ITS1和ITS2序列均顯示102個變異位點；14種山藥種質(zhì)K2-P遺傳距離為0～0.517 2；薯蕷Dioscorea opposita、褐苞薯蕷Dioscorea persimilis、日本薯蕷Dioscore japonica關(guān)系親密，組成單一支系；參薯Dioscorea alata與山薯Dioscorea fordii關(guān)系親密，聚為另一分支，并位于發(fā)育樹基部。結(jié)論 ITS序列系統(tǒng)樹為澄清山藥類資源進化關(guān)系奠定了基礎(chǔ)，序列中豐富的變異位點為多基原山藥鑒別提供了科學(xué)依據(jù)。
目的 分析14種山藥種質(zhì)ITS序列，為山藥種質(zhì)資源分子鑒別和進化關(guān)系研究提供依據(jù)。方法 PCR克隆擴增ITS序列并進行雙向測序，Clustal X（v1.83）軟件進行序列比對，Mega（v4.1）計算序列核苷酸比例及遺傳距離，并構(gòu)建鄰接樹（Neighbor-joining tree，NJ Tree）和最大簡約樹（Maximum parsimony tree，MP Tree）。結(jié)果 14種山藥種質(zhì)ITS序列全長為558～594 bp，其中ITS1長度為141～165 bp，ITS2長度為146～158 bp；ITS序列存在大量的轉(zhuǎn)換、顛換，轉(zhuǎn)化/顛換比率為5.347，ITS1和ITS2序列均顯示102個變異位點；14種山藥種質(zhì)K2-P遺傳距離為0～0.517 2；薯蕷Dioscorea opposita、褐苞薯蕷Dioscorea persimilis、日本薯蕷Dioscore japonica關(guān)系親密，組成單一支系；參薯Dioscorea alata與山薯Dioscorea fordii關(guān)系親密，聚為另一分支，并位于發(fā)育樹基部。結(jié)論 ITS序列系統(tǒng)樹為澄清山藥類資源進化關(guān)系奠定了基礎(chǔ)，序列中豐富的變異位點為多基原山藥鑒別提供了科學(xué)依據(jù)。
2014, 45.
摘要:
目的 建立測定金銀花藥材中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C、斷氧化馬錢子苷8種成分的HPLC方法。方法 采用RP-HPLC法，色譜柱為Luna 5 μ C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫，0～20 min，12%～30% A；20～60 min，30%～50% A，體積流量1.0 mL/min；檢測波長237、324 nm，柱溫30 ℃。結(jié)果 8種成分均達到基線分離，各成分均有較寬的線性范圍和良好的線性關(guān)系（r＞0.999 9）；回收率在98.72%～102.50%。結(jié)論 本方法準(zhǔn)確靈敏、重復(fù)性好，能較全面地評價金銀花藥材的質(zhì)量。
目的 建立測定金銀花藥材中新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸、咖啡酸、異綠原酸A、異綠原酸B、異綠原酸C、斷氧化馬錢子苷8種成分的HPLC方法。方法 采用RP-HPLC法，色譜柱為Luna 5 μ C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液，梯度洗脫，0～20 min，12%～30% A；20～60 min，30%～50% A，體積流量1.0 mL/min；檢測波長237、324 nm，柱溫30 ℃。結(jié)果 8種成分均達到基線分離，各成分均有較寬的線性范圍和良好的線性關(guān)系（r＞0.999 9）；回收率在98.72%～102.50%。結(jié)論 本方法準(zhǔn)確靈敏、重復(fù)性好，能較全面地評價金銀花藥材的質(zhì)量。
2014, 45.
摘要:
目的 研究不同培養(yǎng)條件對鐵皮石斛類原球莖在生物反應(yīng)器中培養(yǎng)的影響。方法 采用接種量、通氣量、蔗糖濃度、光照強度等單因素試驗設(shè)計，烘干法測定生物量，苯酚-硫酸法測定多糖量，數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件分析。結(jié)果 在生物反應(yīng)器培養(yǎng)條件下，利于鐵皮石斛類原球莖增殖和多糖積累的培養(yǎng)基組分為：1/2 MS基本培養(yǎng)基添加1.0 mg/L NAA、5%椰乳、3%蔗糖，pH值為6.0。接種量為40 g/L，采用孔徑為15 μm的多孔噴頭，通氣量用1.0 L/min和0. 5 L/min交替使用以及光照強度為2 000 lx等培養(yǎng)條件有效地提高類原球莖增殖系數(shù)和多糖量。結(jié)論 不同的培養(yǎng)條件對鐵皮石斛類原球莖的生長、多糖的變化有顯著影響，適宜的培養(yǎng)條件對鐵皮石斛類原球莖的生物量和主要藥用成分的生產(chǎn)具有重要的實踐意義。
目的 研究不同培養(yǎng)條件對鐵皮石斛類原球莖在生物反應(yīng)器中培養(yǎng)的影響。方法 采用接種量、通氣量、蔗糖濃度、光照強度等單因素試驗設(shè)計，烘干法測定生物量，苯酚-硫酸法測定多糖量，數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件分析。結(jié)果 在生物反應(yīng)器培養(yǎng)條件下，利于鐵皮石斛類原球莖增殖和多糖積累的培養(yǎng)基組分為：1/2 MS基本培養(yǎng)基添加1.0 mg/L NAA、5%椰乳、3%蔗糖，pH值為6.0。接種量為40 g/L，采用孔徑為15 μm的多孔噴頭，通氣量用1.0 L/min和0. 5 L/min交替使用以及光照強度為2 000 lx等培養(yǎng)條件有效地提高類原球莖增殖系數(shù)和多糖量。結(jié)論 不同的培養(yǎng)條件對鐵皮石斛類原球莖的生長、多糖的變化有顯著影響，適宜的培養(yǎng)條件對鐵皮石斛類原球莖的生物量和主要藥用成分的生產(chǎn)具有重要的實踐意義。
2014, 45.
摘要:
目的 對栽培太子參的遺傳多樣性與藥材質(zhì)量進行綜合評價，為合理利用太子參種質(zhì)資源及優(yōu)良品種選育提供依據(jù)。方法 采用ISSR分子標(biāo)記分析太子參12個栽培種源的遺傳多樣性，并用HPLC測定各種源藥材中太子參環(huán)肽B的量。結(jié)果 10條ISSR引物擴增出82條帶，其中多態(tài)性條帶73條，多態(tài)位點百分率（PPL）為89.02%。Nei’s遺傳多樣性指數(shù)（H）平均值0.257 9，Shannon’s多態(tài)性指數(shù)（I）平均值為0.388 4，遺傳分化系數(shù)（Gst）為0.274 1，種源間基因流（Nm）為1.323 8。基于遺傳一致度，12個種源可聚為3類。太子參環(huán)肽B量在種源間和種源內(nèi)個體差異較大，種源4的太子參環(huán)肽B量（0.049 4%）明顯高于其他種源，且種源內(nèi)變異系數(shù)（9.51%）較小。結(jié)論 栽培太子參各產(chǎn)地間的換種及其生物學(xué)特性是其遺傳多樣性水平豐富的主要原因；綜合考慮遺傳多樣性水平和太子參環(huán)肽B量，種源3和4種質(zhì)資源優(yōu)良，適宜作為太子參種質(zhì)資源保存及優(yōu)良品種選育的對象。
目的 對栽培太子參的遺傳多樣性與藥材質(zhì)量進行綜合評價，為合理利用太子參種質(zhì)資源及優(yōu)良品種選育提供依據(jù)。方法 采用ISSR分子標(biāo)記分析太子參12個栽培種源的遺傳多樣性，并用HPLC測定各種源藥材中太子參環(huán)肽B的量。結(jié)果 10條ISSR引物擴增出82條帶，其中多態(tài)性條帶73條，多態(tài)位點百分率（PPL）為89.02%。Nei’s遺傳多樣性指數(shù)（H）平均值0.257 9，Shannon’s多態(tài)性指數(shù)（I）平均值為0.388 4，遺傳分化系數(shù)（Gst）為0.274 1，種源間基因流（Nm）為1.323 8。基于遺傳一致度，12個種源可聚為3類。太子參環(huán)肽B量在種源間和種源內(nèi)個體差異較大，種源4的太子參環(huán)肽B量（0.049 4%）明顯高于其他種源，且種源內(nèi)變異系數(shù)（9.51%）較小。結(jié)論 栽培太子參各產(chǎn)地間的換種及其生物學(xué)特性是其遺傳多樣性水平豐富的主要原因；綜合考慮遺傳多樣性水平和太子參環(huán)肽B量，種源3和4種質(zhì)資源優(yōu)良，適宜作為太子參種質(zhì)資源保存及優(yōu)良品種選育的對象。
2014, 45.
摘要:
目的 建立紫背金盤Ajugae nipponensis愈傷組織誘導(dǎo)體系，篩選出具較高再生率的植株發(fā)生途徑，旨在構(gòu)建高效、穩(wěn)定的再生體系。方法 MS為基本培養(yǎng)基，添加不同種類和濃度配比的植物生長調(diào)節(jié)劑，以莖尖、帶芽莖段和花序為外植體進行實驗。結(jié)果 花序是較適宜誘導(dǎo)愈傷組織的外植體，在MS＋6-BA 0.1 mg/L＋2, 4-D 1.5 mg/L中可在1周內(nèi)誘導(dǎo)出愈傷組織，2周后即分化出綠色小芽叢；叢生芽增殖的適宜培養(yǎng)基為MS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L，愈傷組織芽叢再生率高達100%，再生系數(shù)為4.10，4周后增殖倍數(shù)5.0以上；生根的適宜培養(yǎng)基為1/2 MS＋NAA 1.0 mg/L，3周后即可獲得再生植株，生根率100%；生根苗移栽至排水良好的沙土中，成活率100%。結(jié)論 紫背金盤不同外植體均可誘導(dǎo)出愈傷組織，其中花序愈傷發(fā)生率最好，是最適宜的外植體；本研究為保護紫背金盤野生資源和發(fā)展人工栽培奠定了良好基礎(chǔ)，也為遺傳轉(zhuǎn)化研究提供重要的科學(xué)依據(jù)。
目的 建立紫背金盤Ajugae nipponensis愈傷組織誘導(dǎo)體系，篩選出具較高再生率的植株發(fā)生途徑，旨在構(gòu)建高效、穩(wěn)定的再生體系。方法 MS為基本培養(yǎng)基，添加不同種類和濃度配比的植物生長調(diào)節(jié)劑，以莖尖、帶芽莖段和花序為外植體進行實驗。結(jié)果 花序是較適宜誘導(dǎo)愈傷組織的外植體，在MS＋6-BA 0.1 mg/L＋2, 4-D 1.5 mg/L中可在1周內(nèi)誘導(dǎo)出愈傷組織，2周后即分化出綠色小芽叢；叢生芽增殖的適宜培養(yǎng)基為MS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.5 mg/L，愈傷組織芽叢再生率高達100%，再生系數(shù)為4.10，4周后增殖倍數(shù)5.0以上；生根的適宜培養(yǎng)基為1/2 MS＋NAA 1.0 mg/L，3周后即可獲得再生植株，生根率100%；生根苗移栽至排水良好的沙土中，成活率100%。結(jié)論 紫背金盤不同外植體均可誘導(dǎo)出愈傷組織，其中花序愈傷發(fā)生率最好，是最適宜的外植體；本研究為保護紫背金盤野生資源和發(fā)展人工栽培奠定了良好基礎(chǔ)，也為遺傳轉(zhuǎn)化研究提供重要的科學(xué)依據(jù)。
2014, 45.
摘要:
目的 microRNAs（miRNA）是一類非編碼的單鏈小分子RNA，在植物的生長發(fā)育、逆境適應(yīng)和代謝調(diào)控等過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。本研究擬利用地黃EST數(shù)據(jù)通過生物信息學(xué)手段預(yù)測新的地黃miRNA，為今后地黃miRNA的生物學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。方法 本研究根據(jù)miRNA 家族在不同物種中的保守性，將miRBase數(shù)據(jù)庫中的已知植物miRNA與通過高通量測序獲得的93172條地黃EST序列進行同源比對，按照miRNA前體應(yīng)具備的標(biāo)準(zhǔn)進行篩選。結(jié)果 預(yù)測到分屬于8個家族的8條潛在地黃miRNA序列，并通過實時熒光定量PCR對8條預(yù)測的miRNA進行了檢測，證實8條miRNA在地黃中真實存在。隨后利用軟件對8條地黃miRNA的靶基因進行預(yù)測，發(fā)現(xiàn)其靶基因主要編碼與地黃生長發(fā)育、代謝以及脅迫響應(yīng)等過程相關(guān)的蛋白。結(jié)論 新預(yù)測的地黃miRNA及其靶基因為今后研究它們在地黃中的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。
目的 microRNAs（miRNA）是一類非編碼的單鏈小分子RNA，在植物的生長發(fā)育、逆境適應(yīng)和代謝調(diào)控等過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。本研究擬利用地黃EST數(shù)據(jù)通過生物信息學(xué)手段預(yù)測新的地黃miRNA，為今后地黃miRNA的生物學(xué)研究奠定基礎(chǔ)。方法 本研究根據(jù)miRNA 家族在不同物種中的保守性，將miRBase數(shù)據(jù)庫中的已知植物miRNA與通過高通量測序獲得的93172條地黃EST序列進行同源比對，按照miRNA前體應(yīng)具備的標(biāo)準(zhǔn)進行篩選。結(jié)果 預(yù)測到分屬于8個家族的8條潛在地黃miRNA序列，并通過實時熒光定量PCR對8條預(yù)測的miRNA進行了檢測，證實8條miRNA在地黃中真實存在。隨后利用軟件對8條地黃miRNA的靶基因進行預(yù)測，發(fā)現(xiàn)其靶基因主要編碼與地黃生長發(fā)育、代謝以及脅迫響應(yīng)等過程相關(guān)的蛋白。結(jié)論 新預(yù)測的地黃miRNA及其靶基因為今后研究它們在地黃中的生物學(xué)功能奠定了基礎(chǔ)。
2014, 45.
摘要:
目的 優(yōu)化大花紅景天再生體系并建立抗性篩選最佳條件，為建立大花紅景天高效遺傳轉(zhuǎn)化體系奠定基礎(chǔ)。方法 以大花紅景天葉片為外植體，觀察再生過程各階段在不同配比的6-BA、NAA、IBA誘導(dǎo)下的誘導(dǎo)率及生長狀況，并利用梯度篩選出外植體對卡那霉素（Kan）和抗潮霉素（Hyg）的抗性。結(jié)果 MS＋3.0 mg/L 6-BA＋1.0 mg/L NAA＋700 mg/L L-Pro為葉片不定芽分化的最佳培養(yǎng)基，分化率達到92%；MS＋700 mg/L L-Pro為根培養(yǎng)基；200 mg/L Kan，10 mg/L Hyg為大花紅景天遺傳轉(zhuǎn)化的最佳篩選壓；培養(yǎng)過程中添加10 mg/L Vc能有效抑制酚類物質(zhì)的外泌。結(jié)論 優(yōu)化了大花紅景天植株再生體系，篩選出適宜于大花紅景天遺傳轉(zhuǎn)化體系的Kan和Hyg篩選壓。
目的 優(yōu)化大花紅景天再生體系并建立抗性篩選最佳條件，為建立大花紅景天高效遺傳轉(zhuǎn)化體系奠定基礎(chǔ)。方法 以大花紅景天葉片為外植體，觀察再生過程各階段在不同配比的6-BA、NAA、IBA誘導(dǎo)下的誘導(dǎo)率及生長狀況，并利用梯度篩選出外植體對卡那霉素（Kan）和抗潮霉素（Hyg）的抗性。結(jié)果 MS＋3.0 mg/L 6-BA＋1.0 mg/L NAA＋700 mg/L L-Pro為葉片不定芽分化的最佳培養(yǎng)基，分化率達到92%；MS＋700 mg/L L-Pro為根培養(yǎng)基；200 mg/L Kan，10 mg/L Hyg為大花紅景天遺傳轉(zhuǎn)化的最佳篩選壓；培養(yǎng)過程中添加10 mg/L Vc能有效抑制酚類物質(zhì)的外泌。結(jié)論 優(yōu)化了大花紅景天植株再生體系，篩選出適宜于大花紅景天遺傳轉(zhuǎn)化體系的Kan和Hyg篩選壓。
17 檵木中銀椴苷的提取及測定
2014, 45.
摘要:
目的 研究檵木中銀椴苷的提取分離及對銀椴苷進行質(zhì)量控制。方法 采用乙醇回流法提取藥材，然后經(jīng)過大孔樹脂、減壓硅膠柱色譜、洗脫，得到銀椴苷單體，采用Cosmosil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（55∶45），檢測波長為320 nm，體積流量1.0 mL/min。結(jié)果 銀椴苷單體能夠很好的分離出來，質(zhì)量分數(shù)為98%，銀椴苷在0.041～0.513 μg呈良好的線性關(guān)系（r＝0.999 7）；平均回收率為100.05%，RSD為1.50%；結(jié)論 運用此方法能將銀椴苷較好的提取分離，同時測定方法不僅操作簡單、準(zhǔn)確，且重復(fù)性好，可用于檵木中銀椴苷的測定。
目的 研究檵木中銀椴苷的提取分離及對銀椴苷進行質(zhì)量控制。方法 采用乙醇回流法提取藥材，然后經(jīng)過大孔樹脂、減壓硅膠柱色譜、洗脫，得到銀椴苷單體，采用Cosmosil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相為甲醇-0.1%磷酸水溶液（55∶45），檢測波長為320 nm，體積流量1.0 mL/min。結(jié)果 銀椴苷單體能夠很好的分離出來，質(zhì)量分數(shù)為98%，銀椴苷在0.041～0.513 μg呈良好的線性關(guān)系（r＝0.999 7）；平均回收率為100.05%，RSD為1.50%；結(jié)論 運用此方法能將銀椴苷較好的提取分離，同時測定方法不僅操作簡單、準(zhǔn)確，且重復(fù)性好，可用于檵木中銀椴苷的測定。
2014, 45.
摘要:
目的 對菊科藥用植物菊Chrysanthemum morifolium非藥用部位化學(xué)成分的分布和動態(tài)積累進行分析評價，為該藥用生物資源的綜合利用提供科學(xué)依據(jù)。方法 分別采用超高效液相-三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（UPLC-TQ/MS）、紫外可見分光光度法（UV）、超高效液相-二極管陣列檢測器（UPLC-DAD），測定不同生長期菊根、莖、葉中氨基酸類、核苷類、黃酮類及有機酸類成分的存在及其量。結(jié)果 氨基酸類成分分析結(jié)果表明，菊的根、莖、葉中檢測到13種氨基酸，總氨基酸的量分布順序為：根＞葉＞莖；核苷類成分分析結(jié)果表明，菊葉中檢測到4種核苷，莖和根中分別檢測到2種核苷，總核苷的量分布順序為：葉＞根＞莖；黃酮類成分分析結(jié)果表明，總黃酮類成分的量分布順序為：葉＞根＞莖，其中葉片所含黃酮類成分量為9.94%～18.66%，根中質(zhì)量分數(shù)為5.88%～8.02%，莖中質(zhì)量分數(shù)為3.98%～5.41%；有機酸類成分分析表明，總有機酸的質(zhì)量分數(shù)分布順序為：葉＞根＞莖，葉中質(zhì)量分數(shù)為2.44%～4.94%，根中量為1.89%～2.64%，莖中質(zhì)量分數(shù)為1.20%～1.48%。不同生長期菊根、莖、葉中黃酮類和有機酸類成分量發(fā)生動態(tài)變化，在菊花采摘后達到高峰。結(jié)論 菊非藥用部位尤其是葉中含有豐富的資源性化學(xué)成分，且在采摘花序后為資源豐產(chǎn)期。該研究結(jié)果為菊花采收后廢棄物的資源化利用提供了有益的借鑒。
目的 對菊科藥用植物菊Chrysanthemum morifolium非藥用部位化學(xué)成分的分布和動態(tài)積累進行分析評價，為該藥用生物資源的綜合利用提供科學(xué)依據(jù)。方法 分別采用超高效液相-三重四級桿質(zhì)譜聯(lián)用儀（UPLC-TQ/MS）、紫外可見分光光度法（UV）、超高效液相-二極管陣列檢測器（UPLC-DAD），測定不同生長期菊根、莖、葉中氨基酸類、核苷類、黃酮類及有機酸類成分的存在及其量。結(jié)果 氨基酸類成分分析結(jié)果表明，菊的根、莖、葉中檢測到13種氨基酸，總氨基酸的量分布順序為：根＞葉＞莖；核苷類成分分析結(jié)果表明，菊葉中檢測到4種核苷，莖和根中分別檢測到2種核苷，總核苷的量分布順序為：葉＞根＞莖；黃酮類成分分析結(jié)果表明，總黃酮類成分的量分布順序為：葉＞根＞莖，其中葉片所含黃酮類成分量為9.94%～18.66%，根中質(zhì)量分數(shù)為5.88%～8.02%，莖中質(zhì)量分數(shù)為3.98%～5.41%；有機酸類成分分析表明，總有機酸的質(zhì)量分數(shù)分布順序為：葉＞根＞莖，葉中質(zhì)量分數(shù)為2.44%～4.94%，根中量為1.89%～2.64%，莖中質(zhì)量分數(shù)為1.20%～1.48%。不同生長期菊根、莖、葉中黃酮類和有機酸類成分量發(fā)生動態(tài)變化，在菊花采摘后達到高峰。結(jié)論 菊非藥用部位尤其是葉中含有豐富的資源性化學(xué)成分，且在采摘花序后為資源豐產(chǎn)期。該研究結(jié)果為菊花采收后廢棄物的資源化利用提供了有益的借鑒。
2014, 45.
摘要:
目的 為了明確內(nèi)源多胺是否介導(dǎo)真菌誘導(dǎo)子誘導(dǎo)白樺三萜的合成。方法 將40 μg/mL真菌誘導(dǎo)子、1 mmol/L腐胺（Put）和2 mmol/L多胺合成抑制劑D-精氨酸（D-Arg）添加到培養(yǎng)8 d的白樺懸浮培養(yǎng)體系中，利用高效液相色譜和比色法分析多胺量和三萜量。采用藥理學(xué)和恢復(fù)實驗分析多胺在真菌誘導(dǎo)子誘導(dǎo)白樺三萜合成中的作用。結(jié)果 真菌誘導(dǎo)子或Put處理后，白樺懸浮細胞中的多胺量、三萜量和產(chǎn)量均呈增加趨勢，其中處理24 h時，三萜量達最大值，分別增加了68.54%和30.34%。真菌誘導(dǎo)子和Put共同處理雖提高了三萜量，但其產(chǎn)量卻低于真菌誘導(dǎo)子單獨處理。真菌誘導(dǎo)子和D-Arg共同處理后三萜量低于真菌誘導(dǎo)子單獨處理，處理24 h時降低程度最高，為40.57%。恢復(fù)實驗發(fā)現(xiàn)，隨著恢復(fù)時間的延長，真菌誘導(dǎo)子、Put以及真菌誘導(dǎo)子與D-Arg對白樺三萜合成的影響效應(yīng)逐漸減弱，恢復(fù)到對照水平。結(jié)論 多胺介導(dǎo)了真菌誘導(dǎo)子促進白樺懸浮細胞中三萜的合成。
目的 為了明確內(nèi)源多胺是否介導(dǎo)真菌誘導(dǎo)子誘導(dǎo)白樺三萜的合成。方法 將40 μg/mL真菌誘導(dǎo)子、1 mmol/L腐胺（Put）和2 mmol/L多胺合成抑制劑D-精氨酸（D-Arg）添加到培養(yǎng)8 d的白樺懸浮培養(yǎng)體系中，利用高效液相色譜和比色法分析多胺量和三萜量。采用藥理學(xué)和恢復(fù)實驗分析多胺在真菌誘導(dǎo)子誘導(dǎo)白樺三萜合成中的作用。結(jié)果 真菌誘導(dǎo)子或Put處理后，白樺懸浮細胞中的多胺量、三萜量和產(chǎn)量均呈增加趨勢，其中處理24 h時，三萜量達最大值，分別增加了68.54%和30.34%。真菌誘導(dǎo)子和Put共同處理雖提高了三萜量，但其產(chǎn)量卻低于真菌誘導(dǎo)子單獨處理。真菌誘導(dǎo)子和D-Arg共同處理后三萜量低于真菌誘導(dǎo)子單獨處理，處理24 h時降低程度最高，為40.57%。恢復(fù)實驗發(fā)現(xiàn)，隨著恢復(fù)時間的延長，真菌誘導(dǎo)子、Put以及真菌誘導(dǎo)子與D-Arg對白樺三萜合成的影響效應(yīng)逐漸減弱，恢復(fù)到對照水平。結(jié)論 多胺介導(dǎo)了真菌誘導(dǎo)子促進白樺懸浮細胞中三萜的合成。
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