摘要:
目的 利用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法研究地菍總黃酮抗2型糖尿病的作用機制,通過動物實驗對靶點進行驗證。方法 通過文獻(xiàn)檢索收集地菍總黃酮的化學(xué)成分,并在Swiss Target Prediction平臺進行篩選;依據(jù)Swiss Target Prediction、GeneCards、TTD、DrugBank數(shù)據(jù)庫預(yù)測和篩選地菍總黃酮成分治療2型糖尿病的作用靶點;由Cytoscape 3.7.1構(gòu)建“成分–疾病–靶點”網(wǎng)絡(luò);String數(shù)據(jù)庫構(gòu)建靶點蛋白相互作用(PPI)網(wǎng)絡(luò);R語言對靶點基因進行基因本體(GO)富集分析及京都基因和基因組百科全書(KEGG)通路富集分析。以高脂飲食誘導(dǎo)和ip鏈脲佐菌素(STZ)方法構(gòu)建2型糖尿病模型大鼠,將2型糖尿病模型造模成功的40只大鼠隨機分成模型組,二甲雙胍組(0.2 g/kg)組,地菍總黃酮(0.34、0.45、0.60 g/kg)組,每組8只,繼續(xù)提供高脂飼料喂養(yǎng),另設(shè)對照組。各組每天ig相應(yīng)藥物,1次/d,對照組和模型組ig 0.5% CMC-Na溶液,連續(xù)給藥5周。記錄大鼠體質(zhì)量、飲水量和攝食量,檢測大鼠血糖及血脂的相關(guān)指標(biāo),運用qPCR法檢測地菍總黃酮對2型糖尿病大鼠肝組織中磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)作用靶點的調(diào)控作用。Western blotting法檢測各組大鼠肝臟中Akt、AMPK、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白-1C(SREBP-1C)的蛋白相對表達(dá)量。結(jié)果 從地菍總黃酮成分中篩選得到槲皮素、芹菜素、柚皮素等8種活性成分,作用于98個2型糖尿病靶點,GO功能與KEGG富集分析表明,地菍總黃酮抗糖尿病主要通過調(diào)節(jié)PI3K/Akt信號通路、AMPK相關(guān)信號通路等來發(fā)揮抗2型糖尿病的作用。動物實驗證實,地菍總黃酮可降低2型糖尿病大鼠的空腹血糖(FBG),抑制血脂升高,上調(diào)2型糖尿病大鼠肝臟PI3K、Akt、AMPK mRNA表達(dá),顯著增加Akt、AMPK蛋白表達(dá)含量,降低SREBP-1C蛋白表達(dá)含量(P<0.01、0.05),對糖、脂代謝紊亂均具有改善作用,具有良好的抗2型糖尿病作用。結(jié)論 驗證了地菍總黃酮多成分、多靶點、多途徑治療2型糖尿病的特點,其抗糖尿病的作用機制可能與調(diào)節(jié)PI3K、Akt、AMPK、SREBP-1C靶點的表達(dá)水平,從而改善糖脂代謝紊亂有關(guān),為后續(xù)更進一步研究作用機制提供參考。